کیت تشخیص اسید نوکلئیک کروناویروس جدید (SARS-Cov-2).
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluسنگ معدنscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Pمحصولt name 】کیت تشخیص اسید نوکلئیک ویروس جدید (SARS-Cov-2) (روش پروب RT-PCR فلورسنت)
【Packaging specifications 】25 تست / کیت
【Intended usسن】
این کیت برای تشخیص کیفی اسید نوکلئیک از ویروس کرونای جدید در سواب‌های نازوفارنکس، سواب‌های اوروفارنکس (گلو)، سواب‌های قدامی بینی، سواب‌های میانی شاخک، شستشوی بینی و آسپیراسیون بینی از افرادی که توسط پزشک مشکوک به COVID19 هستند، استفاده می‌شود. تشخیص ژن‌های ORF1ab و N کروناویروس جدید می‌تواند برای تشخیص کمکی و پایش اپیدمیولوژیک عفونت کروناویروس جدید استفاده شود.
【Principles of the pروسdure 】
این کیت برای پروب های TaqMan خاص و پرایمرهای خاص طراحی شده برای توالی های ژنی ORF1ab و N ویروس کرونای جدید (SARS-Cov-2) طراحی شده است. محلول واکنش PCR شامل 3 مجموعه پرایمرهای خاص و پروب های فلورسنت برای تشخیص خاص اهداف است و یک مجموعه اضافی از پرایمرهای خاص و پروب های فلورسنت به عنوان کنترل استاندارد داخلی کیت برای تشخیص ژن های خانه داری درون زا استفاده می شود.
اصل آزمایش این است که پروب فلورسنت خاص توسط فعالیت اگزونوکلئاز آنزیم Taq در واکنش PCR هضم و تجزیه می شود، به طوری که گروه فلورسنت گزارشگر و گروه فلورسنت خاموش شده جدا می شوند، به طوری که سیستم نظارت بر فلورسانس می تواند فلورسنت دریافت کند. سیگنال، و سپس از طریق اثر غنی سازی تقویت PCR، سیگنال فلورسانس پروب به مقدار آستانه تعیین شده - مقدار Ct (آستانه چرخه) می رسد. در صورت عدم وجود آمپلیکون هدف، گروه گزارشگر کاوشگر به گروه خاموش کننده نزدیک است. در این زمان، انتقال انرژی رزونانس فلورسانس رخ می دهد و فلورسانس گروه گزارشگر توسط گروه خاموش کننده خاموش می شود، به طوری که سیگنال فلورسنت توسط ابزار فلورسنت PCR قابل تشخیص نیست.
به منظور نظارت بر استفاده از معرف ها در طول آزمایش، کیت به کنترل های مثبت و منفی مجهز شده است: کنترل مثبت حاوی پلاسمید نوترکیب محل هدف است و کنترل منفی آب مقطر است که برای نظارت بر آلودگی محیطی استفاده می شود. توصیه می شود هنگام انجام آزمایش، یک کنترل مثبت و یک کنترل منفی را به طور همزمان تنظیم کنید.
【Main comپوننts 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | کامپونents | |
| نامe | مشخصاتتبدیل | مقدارity | مقدارity | |
| کنترل مثبت | 180 میکرولیتر در ویال | 1 | 1 | پلاسمیدهای ساخته شده مصنوعی، آب مقطر |
| کنترل منفی | 180 میکرولیتر در ویال | 1 | 1 | آب مقطر |
| مخلوط SARS-Cov-2 | 358.5 میکرولیتر در ویال | 1 | / | جفت آغازگرهای خاص، پروب های فلورسنت تشخیص خاص، dNTPs، MgCl2، KCl، Tris-Hcl، آب مقطر و غیره |
| مخلوط آنزیمی | 16.5 میکرولیتر در ویال | 1 | / | آنزیم های Taq، ترانس کریپتاز معکوس، آنزیم های UNG و غیره. |
| مخلوط SARS-Cov-2 (لیوفیل شده) | 25 آزمایش / ویال | / | 1 | جفت پرایمرهای خاص، پروب های فلورسنت تشخیص خاص، dNTPs، آنزیم های Taq، رونوشت معکوس، آب مقطر و غیره. |
| 2 برابر بافر | 375 میکرولیتر در ویال | / | 1 | MgCl2، KCl، Tris-Hcl، آب مقطر و غیره. |
توجه داشته باشید：(1) اجزای موجود در کیت های دسته ای مختلف را نمی توان مخلوط یا تعویض کرد.
(2) معرف خود را آماده کنید: کیت استخراج اسید نوکلئیک.
【Storage conditions و expiration date 】
For BST-SARS-25:حمل و نقل و نگهداری در -20±5℃ برای مدت طولانی.
For BST-SARS-DR-25:حمل و نقل در دمای اتاق. برای مدت طولانی در دمای -20±5℃ نگهداری شود.
از تکرار چرخه های انجماد و ذوب خودداری کنید. مدت اعتبار به طور آزمایشی برای 12 ماه تعیین شده است.
برای تاریخ ساخت و استفاده به برچسب مراجعه کنید.
پس از اولین باز کردن، معرف را می توان در دمای 5±20- درجه سانتیگراد به مدت حداکثر 1 ماه یا تا پایان دوره معرف، هر تاریخ که اول باشد، نگهداری کرد تا از تکرار چرخه های انجماد و ذوب و تعداد دفعات انجماد معرف جلوگیری شود. - چرخه ذوب نباید بیش از 6 بار باشد.
【Applicable instrument】ABI 7500، SLAN-96P، Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. نوع نمونه قابل استفاده: محلول اسید نوکلئیک استخراج شده.
2. ذخیره سازی و حمل و نقل نمونه: در دمای 5±20 درجه سانتیگراد به مدت 6 ماه نگهداری کنید. نمونه ها را بیش از 6 بار منجمد و ذوب کنید.
【Testing metهود】
1.Nucleic acid extraction
یک کیت استخراج اسید نوکلئیک مناسب برای استخراج اسید نوکلئیک ویروسی انتخاب کنید و دستورالعمل های کیت مربوطه را دنبال کنید. توصیه می شود از کیت استخراج و تصفیه اسید نوکلئیک تولید شده توسط Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. یا کیت تصفیه اسید نوکلئیک معادل آن استفاده کنید.
2. Reaction reagent prepآراtion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) مخلوط SARS-Cov-2 و آنزیم مخلوط را بردارید، در دمای اتاق کاملاً توسط دستگاه Vortex ذوب شده و سپس برای مدت کوتاهی سانتریفیوژ کنید.
(2) 16.5uL آنزیم Mix به 358.5uL SARS-Cov-2 Mix اضافه شد و کاملاً مخلوط شد تا محلول واکنش مخلوط به دست آید.
(3) یک لوله اکتالی 0.2 میلی لیتری PCR تهیه کنید و آن را با 15 مولتی لیتر از محلول واکنش مخلوط بالا در هر چاه علامت گذاری کنید.
(4) 15 میکرولیتر محلول اسید نوکلئیک خالص شده، کنترل مثبت و کنترل منفی را اضافه کنید و درپوش لوله اکتال را با دقت بپوشانید.
(5) با وارونه کردن به خوبی مخلوط کنید و به سرعت سانتریفیوژ کنید تا مایع در انتهای لوله غلیظ شود.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) برای آماده سازی مخلوط واکنش، 375 لیتر بافر 2 برابر را به SARS-Cov-2 Mix ((لیوفیل شده) اضافه کنید. با پیپت کردن کاملاً مخلوط کنید و سپس برای مدت کوتاهی سانتریفیوژ کنید. (پس از آماده شدن مخلوط واکنش، توصیه می شود در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری شود. ذخیره سازی طولانی مدت.)
(2) یک لوله اکتال 0.2 میلی لیتری PCR آماده کنید و آن را با 15 میکرولیتر مخلوط واکنش در هر چاه علامت گذاری کنید.
(3) 15 میکرولیتر محلول اسید نوکلئیک خالص شده، کنترل مثبت و کنترل منفی را اضافه کنید و درپوش لوله اکتال را با دقت بپوشانید.
(4) با وارونه کردن به خوبی مخلوط کنید و به سرعت سانتریفیوژ کنید تا مایع در انتهای لوله غلیظ شود.
3. PCR amplification (لطفاً برای تنظیمات عملکرد به دفترچه راهنمای ابزار مراجعه کنید.)
3. 1 لوله PCR 8 را در محفظه نمونه دستگاه PCR فلورسنت قرار دهید و نمونه مورد آزمایش، کنترل مثبت و کنترل منفی را با توجه به ترتیب بارگذاری تنظیم کنید.
3.2 کانال تشخیص فلورسانس:
(1) ژن ORF1ab کانال تشخیص FAM را انتخاب می کند (گزارشگر: FAM، Quencher: هیچ).
(2) ژن N کانال تشخیص VIC را انتخاب می کند (گزارشگر: VIC، Quencher: هیچ).
(3) ژن استاندارد داخلی کانال تشخیص CY5 را انتخاب می کند (گزارشگر: CY5، Quencher: هیچ).
(4) مرجع غیرفعال روی ROX تنظیم شده است.
3.3 تنظیم پارامتر برنامه PCR:
| مرحله | دما (℃) | زمان | تعداد چرخه ها | |
| 1 | واکنش رونویسی معکوس | 50 | 15 دقیقه | 1 |
| 2 | فعال سازی آنزیم Taq | 95 | 2.5 دقیقه | 1 |
| 3 | فعال سازی آنزیم Taq | 93 | 10 ثانیه | 43 |
| بازپخت پسوند و کسب فلورسانس | 55 | 30 ثانیه | ||
پس از تنظیم، فایل را ذخیره کنید و برنامه واکنش را اجرا کنید.
4.Results analysis
پس از پایان برنامه، نتایج به طور خودکار ذخیره می شوند و منحنی تقویت تجزیه و تحلیل می شود. منحنی تقویت بر روی آستانه پیش فرض ابزار تنظیم شده است.
【Explanation of test results 】
1. تعیین اعتبار آزمایش: کانال کنترل مثبت FAM، VIC باید منحنی تقویت معمولی داشته باشد و مقدار Ct به طور کلی کمتر از 34 است، اما ممکن است به دلیل تنظیمات آستانه متفاوت ابزارهای مختلف، نوسان داشته باشد. کانال کنترل منفی FAM، VIC باید Ct تقویت نشده باشد. موافقت می شود که شرایط فوق باید همزمان رعایت شود، در غیر این صورت این آزمون نامعتبر است.
2. قضاوت نتیجه
| کانال FAM/VIC | نتیجه قضاوت |
| Ct＜37 | تست نمونه مثبت است |
| 37≤Ct＜40 | منحنی تقویت S شکل است و نمونه های مشکوک باید دوباره بررسی شوند. اگر نتایج آزمون مجدد یکسان باشد، مثبت ارزیابی می شود و در غیر این صورت منفی است |
| Ct≥40 یا بدون تقویت | تست نمونه منفی است (یا زیر حد پایین تشخیص کیت) |
توجه: (1) اگر هر دو کانال FAM و کانال VIC به طور همزمان مثبت باشند، SARS-Cov-2 مثبت تشخیص داده می شود.
(2) اگر کانال FAM یا کانال VIC مثبت و کانال دیگر منفی باشد، آزمایش باید تکرار شود. اگر همزمان مثبت باشد، SARS-Cov-2 مثبت و در غیر این صورت به عنوان SARS-Cov-2 منفی ارزیابی می شود.
محصولات مرتبط
-
کیت تشخیص آنتی بادی IgM/IgG COVID-19
کیت تشخیص آنتی بادی COVID-19 (روش ایمونوکروماتوگرافی طلای کلوئیدی) راهنمای محصول 【نام محصول】 کیت تشخیص آنتی بادی IgM/IgG 19 （تست کلوئیدی طلایی 【تست ایمونوکروماتوگرافی طلایی 【تست ایمونوکروماتوگرافی کلوئیدی s/kit 【 چکیده: کروناویروس های جدید متعلق به جنس β هستند. COVID-19 یک بیماری عفونی حاد تنفسی است. مردم به طور کلی مستعد هستند. در حال حاضر بیماران مبتلا به کروناویروس جدید منبع اصلی...
-
کیت استخراج یا تصفیه اسید نوکلئیک
کیت استخراج یا تصفیه اسید نوکلئیک یا ذخیره شده در دمای -20 درجه سانتیگراد. نمونه باید با استفاده از پیچش 0℃ حمل شود. مقدمه کیت استخراج یا خالص سازی اسید نوکلئیک (روش دانه های مغناطیسی) برای خالص سازی خودکار RNA و DNA از مایعات بدن (مانند سواب، پلاسما، سرم) با استفاده از ابزارهای استخراج خودکار اسید نوکلئیک طراحی شده است. فناوری ذرات مغناطیسی DNA/RNA با کیفیت بالا را فراهم می کند که برای ...
-
کیت سنجش آنتی ژن SARS-CoV-2 (ایمونوکروماتوگر...
کیت سنجش آنتی ژن SARS-CoV-2 (روش ایمونوکروماتوگرافی) کتابچه راهنمای محصول 【نام محصول】 کیت سنجش آنتی ژن SARS-CoV-2 （روش ایمونوکروماتوگرافی) 【مشخصات بسته بندی】 1 تست ویروس کرونا متعلق به شماره ABTRA است. COVID-19 یک بیماری عفونی حاد تنفسی است. مردم به طور کلی مستعد هستند. در حال حاضر بیماران مبتلا به کروناویروس جدید، اصلی ترین...
-
کیت سنجش آنتی ژن SARS-CoV-2
کیت سنجش آنتی ژن SARS-CoV-2 (روش ایمونوکروماتوگرافی) راهنمای محصول 【نام محصول】 کیت سنجش آنتی ژن SARS-CoV-2 （روش ایمونوکروماتوگرافی 【مشخصات بسته بندی】 1 تست ABT/Kit 1 TRACT】 The کروناویروس های جدید متعلق به جنس β هستند. COVID-19 یک بیماری عفونی حاد تنفسی است. مردم به طور کلی مستعد هستند. در حال حاضر، بیماران مبتلا به کروناویروس جدید منبع اصلی عفونت هستند. افراد آلوده بدون علامت ...